Roche uPath HER2 (4B5) image analysis for Breast Algorithm Manual do usuário

Marca: Roche

Modelo: uPath HER2 (4B5) image analysis for Breast Algorithm

Tipo: Manual do usuário

Guia do algoritmo de análise de

imagens da mama uPath HER2 (4B5)

Índice

Introdução 1

Resumo e explicação do algoritmo 2

Utilização prevista 3

Aplicação do produto 3

Objetivo do Guia do algoritmo 3

Signiﬁcado clínico 4

Princípios de teste 5

Limitações 6

Características da rede 7

Proteção de dados 8

Fluxo de trabalho de utilização do algoritmo uPath HER2 (4B5) 9

Fluxo de trabalho do patologista 11

Características de coloração 18

Avaliação do anticorpo VENTANA anti-HER2/neu (4B5) 18

Avaliação da coloração do algoritmo uPath HER2 (4B5) 18

Caraterísticas de desempenho 30

Comparação de métodos 30

Estudos de reprodutibilidade de patologista 31

Estudos de reprodutibilidade de digitalizadores 32

Resolução de problemas 33

Referências 37

Introdução

O Roche uPath enterprise software (uPath enterprise software)

com o algoritmo de análise de imagens da mama uPath HER2

(4B5) (algoritmo uPath HER2 (4B5)) é um sistema de software

concebido para ajudar na avaliação semiquantitativa da

expressão da proteína do recetor 2 do fator de crescimento

epidérmico humano (HER2) em secções histológicas coradas

imuno-histoquimicamente a partir de tecidos normais e

neoplásicos ﬁxados em formol e impregnados em paraﬁna (FFPE).

O uPath enterprise software é uma solução integral de software

para patologia digital que permite aos laboratórios de patologia

adquirir, gerir, visualizar, analisar, partilhar e gerar relatórios

sobre imagens digitais de espécimes patológicos. Utilizando o

uPath enterprise software, o patologista pode visualizar imagens

digitais em diversas ampliações, adicionar anotações, efetuar

medições de secções de tecido, realizar análises de imagens e

gerar relatórios.

Nota: o algoritmo de análise de imagens da mama uPath HER2

(4B5) é uma metodologia auxiliar assistida por computador

que visa ajudar na aquisição e medição de imagens a partir

de lâminas de microscópio de espécimes de tecido mamário

que foram sujeitos a coloração por imuno-histoquímica, com

vista a veriﬁcar a presença da proteína HER2. Para assegurar a

validade das pontuações da análise de imagem, o patologista

tem a responsabilidade de veriﬁcar a respetiva conformidade e

de utilizar controlos apropriados, conforme é especiﬁcado na

folha de métodos do anticorpo VENTANA anti-HER2/neu (4B5)

(disponível em dialog.roche.com).

1 Guia do algoritmo de análise de imagens da mama uPath HER2 (4B5)

Resumo e explicação do algoritmo

No que diz respeito a aplicações de análise de imagem, o

patologista utiliza o uPath enterprise software para selecionar e

contornar uma ou mais regiões de interesse (ROI), podendo cada

ROI ser visualizada em várias ampliações e ser, seguidamente,

analisada pelo algoritmo uPath HER2 (4B5). É gerada uma

contagem do número total de células tumorais alvo e as

células tumorais são estratiﬁcadas em função de estarem ou

não coradas. As células coradas são estratiﬁcadas em função

da intensidade da coloração e da completude da coloração

da membrana. O algoritmo uPath HER2 (4B5) combina a

percentagem de coloração (coradas, não coradas), a intensidade

da coloração (fraca, média, forte) e a completude da coloração

(não coradas, parciais, completas) para gerar uma pontuação

de HER2 numa escala de 0 a 3+. O algoritmo uPath HER2 (4B5)

pode gerar uma pontuação para uma determinada ROI, ou uma

pontuação agregada para todas as ROI selecionadas nessa

lâmina. O patologista pode aceitar a pontuação fornecida pelo

algoritmo uPath HER2 (4B5) ou pode substituir essa pontuação

por uma pontuação diferente. O algoritmo uPath HER2 (4B5) não

faz interpretações independentes dos dados e, por isso, só deve

ser utilizado por um patologista qualiﬁcado, em conjunto com um

exame histológico, a informação clínica relevante e os controlos

adequados. O algoritmo uPath HER2 (4B5) foi concebido e está

indicado para auxiliar o patologista na avaliação da expressão da

proteína HER2 em espécimes de tecido mamário corados com o

anticorpo VENTANA anti-HER2/neu (4B5).

2 Guia do algoritmo de análise de imagens da mama uPath HER2 (4B5)

Aplicação do produto

O algoritmo de análise de imagens da mama uPath HER2

(4B5) está indicado para auxiliar o patologista na deteção

semiquantitativa da proteína HER2 em tecido mamário

neoplásico ﬁxado em formol e impregnado em paraﬁna.

Quando utilizado com o VENTANA anti-HER2/neu (4B5) Rabbit

Monoclonal Primary Antibody (anticorpo VENTANA anti-HER2/

neu (4B5)) está indicado como auxiliar na avaliação de pacientes

de cancro da mama em cujo tratamento esteja a ser considerada

a administração de Herceptin

(trastuzumab), KADCYLA

(ado-trastuzumab emtansina) ou PERJETA

(pertuzumab).

Nota: o algoritmo de análise de imagens da mama uPath HER2

(4B5) é uma metodologia auxiliar assistida por computador

que visa ajudar na aquisição e medição de imagens a partir de

lâminas de microscópio de espécimes de tecido mamário que

foram sujeitos a coloração por imuno-histoquímica, com vista a

veriﬁcar a presença da proteína HER2. Para assegurar a validade

das pontuações da análise de imagem, o patologista tem a

responsabilidade de veriﬁcar a respetiva conformidade e de

utilizar controlos apropriados, conforme é especiﬁcado na folha

de métodos do anticorpo VENTANA anti-HER2/neu (4B5).

Este algoritmo destina-se ao diagnóstico in vitro (IVD).

Utilização prevista

Objetivo do Guia do algoritmo

Este guia do algoritmo uPath HER2 (4B5) (guia do algoritmo)

destina-se a:

• Fornecer informações de referência sobre a utilização prevista

do algoritmo uPath HER2 (4B5), bem como sobre os princípios e

as limitações do teste.

• Deﬁnir os materiais, meios informáticos, segurança de dados e

requisitos de rede necessários.

• Apresentar instruções passo a passo para a execução do

algoritmo uPath HER2 (4B5).

• Disponibilizar imagens fotográﬁcas que ilustrem a forma como o

algoritmo uPath HER2 (4B5) deve ser utilizado.

• Disponibilizar uma ferramenta que facilite a utilização do

algoritmo uPath HER2 (4B5) em secções de tecido mamário

FFPE coradas com o anticorpo VENTANA anti-HER2/neu (4B5).

• Disponibilizar imagens exempliﬁcativas de casos complexos,

de modo a explicar a forma como o algoritmo uPath HER2 (4B5)

pode ser utilizado na respetiva avaliação.

• Apresentar as características de desempenho do algoritmo

uPath HER2 (4B5).

3 Guia do algoritmo de análise de imagens da mama uPath HER2 (4B5)

Signiﬁcado clínico

O cancro da mama é o carcinoma mais comum que ocorre

na mulher e a segunda causa de morte relacionada com

o cancro.

1,2

Na América do Norte, a probabilidade de uma

mulher ter cancro da mama é de uma em cada oito.

A deteção

precoce e a utilização de terapêuticas apropriadas podem

afetar signiﬁcativamente a sobrevivência global.

3,4

Pequenas

amostras de tecido podem ser utilizadas facilmente em

imuno-histoquímica (IHQ) de rotina, tornando esta técnica,

em combinação com anticorpos que detetam antigénios

importantes para a interpretação de carcinomas, uma

ferramenta eﬁcaz para os patologistas, em termos de diagnóstico

e prognóstico da doença. Atualmente, a oncoproteína HER2

é um marcador importante no cancro da mama.

5,6,7,8

farmacoterapias com Herceptin (trastuzumab), KADCYLA

(ado-trastuzumab emtansina) e PERJETA (pertuzumab) têm

demonstrado benefícios em alguns pacientes com carcinoma

da mama porque impedem (chegando mesmo, em alguns casos,

a reverter) o crescimento do cancro.

5,6,7,8,9

Estes fármacos são

anticorpos monoclonais humanizados que se ligam à proteína

HER2 nas células cancerígenas.

5,8,9,10

O diagnóstico in vitro para avaliação do estado de HER2 em

pacientes com cancro da mama é um fator importante para ajudar

o médico a determinar a terapêutica direcionada para HER2.

5,6,7,8

O anticorpo VENTANA anti-HER2/neu (4B5) destina-se a ser

utilizado na deteção baseada em IHQ da expressão da proteína

HER2 no cancro da mama. O algoritmo uPath HER2 (4B5) funciona

como um acessório do anticorpo VENTANA anti-HER2/neu (4B5)

para ajudar na avaliação de pacientes com cancro da mama em

cujo tratamento esteja a ser considerada a administração de

Herceptin (trastuzumab), KADCYLA (ado-trastuzumab emtansina)

ou PERJETA (pertuzumab).

4 Guia do algoritmo de análise de imagens da mama uPath HER2 (4B5)

Princípios de teste

Critérios de intensidade e padrão de coloração de

membranas celulares na pontuação do algoritmo uPath

HER2 (4B5):

Padrão de coloração Pontuação Avaliação da

coloração de

HER2

Não é observada coloração da

membrana

0 Negativo

Coloração ténue e parcial da

membrana em qualquer proporção

das células cancerígenas

1+ Negativo

Coloração completa da membrana

de fraca a moderada, >10% das

células cancerígenas

2+ Equívoca*

Coloração completa intensa da

membrana, >10% das células

cancerígenas

3+ Positivo

*Reﬂexo recomendado para ISH

O uPath enterprise software com o algoritmo uPath HER2 (4B5)

recorre a técnicas de análise de imagem para obter uma

pontuação de HER2.

O algoritmo uPath HER2 (4B5) utiliza parâmetros predeﬁnidos

para pontuar as imagens de tecido coradas com o anticorpo

VENTANA anti-HER2/neu (4B5).

Passos envolvidos na análise de imagem:

• Deteção de células em toda a imagem.

• Classiﬁcação das células como células tumorais ou células de

outro tipo.

• Identiﬁcação da membrana corada e estratiﬁcação da

membrana em categorias: coloração parcial ou completa e

intensidade de coloração fraca, média ou forte.

• Cálculo da pontuação de HER2 combinando a classiﬁcação

das células, a intensidade da coloração e a classiﬁcação da

membrana.

Identiﬁcação de células tumorais pelo algoritmo de

análise de imagens HER2 e cálculo da pontuação:

• O algoritmo uPath HER2 (4B5) identiﬁca as células tumorais

utilizando cor, intensidade, dimensão e características

morfológicas.

• As células tumorais identiﬁcadas são classiﬁcadas como

coradas utilizando a membrana detetada e limiares

predeﬁnidos.

• Para calcular a pontuação de HER2, o algoritmo uPath HER2

(4B5) utiliza as células coradas identiﬁcadas e estratiﬁca-as em

função da intensidade e completude da coloração.

5 Guia do algoritmo de análise de imagens da mama uPath HER2 (4B5)

O algoritmo uPath HER2 (4B5) foi concebido para funcionar com

o anticorpo VENTANA anti-HER2/neu (4B5). A qualidade dos

testes depende da qualidade e da exatidão da imagem obtida da

lâmina corada IHQ e da imagem subsequente que é analisada.

O patologista deve validar a execução da coloração do anticorpo

VENTANA anti-HER2/neu (4B5) através de um exame das

lâminas de controlo de HER2 feito utilizando um microscópio

manual, a ﬁm de veriﬁcar se foram obtidos os resultados

previstos, antes de as imagens das lâminas serem aceites no

uPath enterprise software para análise.

Têm de ser seguidas as recomendações do fabricante do

anticorpo VENTANA anti-HER2/neu (4B5), incluindo a utilização

de todos os materiais de controlo da qualidade positivo e

negativo em cada execução de coloração. Se as lâminas de

controlo não forem aceitáveis após o exame com microscópio

manual, é necessário corar novamente os tecidos de forma a

obter resultados aceitáveis.

O patologista tem de seguir as recomendações de interpretação

que dizem respeito ao anticorpo VENTANA anti-HER2/neu (4B5).

O algoritmo uPath HER2 (4B5) foi concebido para ser utilizado

por um patologista qualiﬁcado, em conjunto com um exame

histológico, a informação clínica relevante e os controlos

adequados. Não foi concebido como ferramenta autónoma

e requer intervenção humana competente durante todo o

processo de análise.

O algoritmo uPath HER2 (4B5) pode gerar pontuações incorretas

se as imagens capturadas tiverem uma coloração anormal

(coloração nuclear, pigmentação, etc.).

O algoritmo uPath HER2 (4B5) pode rejeitar núcleos tumorais

alongados, independentemente do formato geral da célula. Por

esta razão, tumores que contenham grandes quantidades de

células com núcleos tumorais alongados poderão ter de ser

avaliados manualmente.

O algoritmo uPath HER2 (4B5) foi estudado, desenvolvido e

validado em: carcinomas invasivos lobulares, ductais, mucinosos,

medulares, papilares e micropapilares, assim como em algumas

lesões metastáticas.

O algoritmo uPath HER2 (4B5) não foi testado, ou a sua

segurança e eﬁcácia não foram validadas, quando utilizado com

um computador pessoal (PC) a partir de casa.

O algoritmo uPath HER2 (4B5) identiﬁca membranas coradas

com DAB de qualquer intensidade e completude. Utiliza um

limiar de ruído de 0,5% de todas as células tumorais para

pontuar um caso como 1+. Não segue as linhas de orientação

da folha de métodos quanto à utilização de um limiar de uma

célula para uma pontuação de 1+. Daqui podem resultar alguns

casos com muito poucas células a cuja coloração membranar é

atribuída uma pontuação de 0 e não de 1+. Este limiar de ruído foi

implementado para garantir que os casos que são verdadeiros

negativos são classiﬁcados como 0.

O algoritmo uPath HER2 (4B5) foi concebido para ser sensível à

cor castanha (coloração DAB), a ﬁm de garantir que é detetada

coloração membranar, mesmo quando é muito ténue. Por

este motivo, pode pontuar incorretamente uma amostra de

tecido que contenha artefactos castanhos, como, por exemplo,

pigmentação, coloração de fundo em ﬁbras musculares ou

quaisquer outros artefactos que tenham coloração castanha.

Existem ferramentas no uPath enterprise software que

permitirão ao patologista excluir áreas nestas circunstâncias.

Estas ferramentas são abordadas em mais detalhe na secção de

características de coloração.

O algoritmo uPath HER2 (4B5) foi concebido para ser sensível

aos casos 2+. Por este motivo, o algoritmo uPath HER2 (4B5)

pode pontuar incorretamente alguns casos 1+ como sendo 2+.

Concretamente, casos 1+ com ligeiramente menos de 10% de

células tumorais com coloração completa ou casos com uma

elevada quantidade de coloração citoplasmática de células

tumorais podem ser pontuados incorretamente como 2+. O

patologista poderá ter de substituir a pontuação nestes tipos

particulares de casos. A coloração citoplasmática é abordada em

mais detalhe na secção de características de coloração.

Limitações

6 Guia do algoritmo de análise de imagens da mama uPath HER2 (4B5)

7 Guia do algoritmo de análise de imagens da mama uPath HER2 (4B5)

Características da rede

É recomendada uma ligação à rede de 1Gbps entre o uPath enterprise software e o sistema de gestão de imagens (Image

Management System, IMS).

Tabela 1. Especiﬁcações do servidor de análise de imagens Roche uPath para laboratórios de pequena dimensão.

Parâmetro Detalhes

Processador CPU @ 3,6 GHz

Número de núcleos 4

RAM 6 x 8GB (48GB)

Hyper-threading Desativado

Disco rígido 240 GB SSD

Sistema operativo Microsoft Windows Server 2016

Suporte de Virtual Machine (VM) Sim

Informações adicionais de VM O desempenho será diferente do dos servidores físicos devido à sobrecarga da VM.

Antivírus Symantec Endpoint Protection, Versão 12

Corrente 110V/220V, 800 Watts (2)

Portas 2 USB, placa de rede HPE Eth 10/25Gb

Fonte de alimentação ininterrupta Recomendado

Tabela 2. Especiﬁcações do servidor de análise de imagens Roche uPath para laboratórios de média a grande dimensão.

Parâmetro Detalhes

Processador CPU @ 3,6 GHz (2 processadores)

Número de núcleos 8 por processador/16 no total

RAM 12 x 8GB (96 GB)

Hyper-threading Desativado

Disco rígido 240 GB SSD (2x)

Sistema operativo Microsoft Windows Server 2016

Suporte de Virtual Machine (VM) Sim

Informações adicionais de VM O desempenho será diferente do dos servidores físicos devido à sobrecarga da VM.

Antivírus Symantec Endpoint Protection, Versão 12

Corrente 110V/220V, 800 Watts (2)

Portas 2 USB, placa de rede HPE Eth 10/25Gb

Fonte de alimentação ininterrupta Recomendado

O acesso não autorizado ao equipamento ou um software

malicioso pode ter como resultado a perda de dados ou a

indisponibilidade do equipamento.

Para evitar que o equipamento seja infetado por software

malicioso ou que ocorra um acesso não autorizado e utilização

indevida do equipamento, é essencial seguir as recomendações

que se seguem:

• Não instale nem execute qualquer outro software no

equipamento.

• Certiﬁque-se de que os outros computadores e serviços na

rede estão devidamente protegidos e seguros contra software

malicioso e acesso não autorizado. Por exemplo, o sistema de

informações laboratoriais (LIS), a partilha de arquivo, a partilha

de cópias de segurança ou a assistência.

• Os clientes são responsáveis pela segurança da sua rede

de área local, especialmente pela proteção da rede contra

software e ataques maliciosos. Esta proteção pode incluir a

implementação de medidas como, por exemplo, uma ﬁrewall,

para proteger o dispositivo contra redes não controladas. Esta

proteção pode igualmente incluir medidas que assegurem que a

rede conectada não contém código malicioso.

• Restrinja o acesso físico ao equipamento e a toda a

infraestrutura de TI associada (computadores, cabos,

equipamento de rede e assim sucessivamente).

• Certiﬁque-se de que os ﬁcheiros de arquivo e cópia de

segurança do equipamento estão protegidos contra qualquer

acesso não autorizado e contra desastres. Esta lista inclui a

localização de armazenamento remoto, sites de descoberta

de desastres e a transferência segura de ﬁcheiros de cópia de

segurança.

• Se possível, utilize uma ﬁrewall para restringir o tráfego na rede.

• Podem ser utilizadas pens USB para realizar e restaurar

diferentes tipos de cópias de segurança. A utilização incorreta

destas pens USB pode ter como resultado a perda de dados ou

uma avaria do equipamento.

• Utilize apenas pens USB que tenham sido testadas e instaladas

pela assistência técnica da Roche local.

• Só pode ser utilizado um dispositivo USB de cada vez. Antes

de introduzir uma pen USB, veriﬁque se não está a ser utilizado

mais nenhum dispositivo USB.

• Antes de remover uma pen USB, escolha o botão Eject (Ejetar)

no Windows.

Proteção de dados

• A conﬁguração predeﬁnida do sistema operativo (SO) fornecida

com o servidor não deve ser alterada, porque se for isso terá

implicações nas conﬁgurações do SO com proteção.

• Para impedir que o uPath enterprise software seja infetado

por um vírus, utilize a pen USB única e exclusivamente nesse

equipamento. Não armazene outros dados nesta pen USB.

8 Guia do algoritmo de análise de imagens da mama uPath HER2 (4B5)

Fluxo de trabalho de utilização do algoritmo uPath HER2 (4B5)

Materiais fornecidos

• Algoritmo uPath HER2 (4B5)

Materiais necessários, mas não fornecidos

• uPath enterprise software

• Lâminas de tecido mamário coradas com o anticorpo VENTANA anti-HER2/neu (4B5) utilizando o ultraView Universal DAB Detection

Kit corado num equipamento BenchMark ULTRA.

• Digitalizador de lâminas VENTANA DP 200

Avisos e precauções

1. Para utilização em diagnóstico in vitro (IVD).

2. Apenas para utilização proﬁssional.

3. ATENÇÃO: nos Estados Unidos, a Lei Federal restringe a venda deste dispositivo a um médico ou mediante receita médica. (Rx Only)

4. Para reportar incidentes graves suspeitos relacionados com este dispositivo, contacte o representante local da Roche e a autoridade

competente do Estado Membro ou do País onde o utilizador está estabelecido.

Fluxo de trabalho

1. O tecido mamário depositado numa lâmina de vidro é corado com o anticorpo VENTANA anti-HER2/neu (4B5) utilizando um

equipamento BenchMark ULTRA.

2. É efetuada a aquisição de imagem (digitalização de toda a lâmina) com o digitalizador de lâminas VENTANA DP 200 utilizando uma

ampliação de 20x num plano z.

3. Depois de adquiridas, as imagens digitais são transferidas do computador associado ao digitalizador de lâminas VENTANA DP 200

para o sistema de gestão de imagens (Image Management System, IMS) num servidor centralizado.

4. A seguir à transferência para o servidor, é criado um caso no uPath enterprise software. A criação do caso pode ocorrer

automaticamente, através de comunicação com o sistema de informações laboratoriais (LIS), utilizando as informações de

identiﬁcação (i.e., tipo de tecido e anticorpo primário) contidas na etiqueta de código de barras da lâmina, ou através de introdução

manual no uPath enterprise software. Consulte o Guia do utilizador do uPath enterprise software (PN 1018943PT).

5. Se o algoritmo uPath HER2 (4B5) estiver instalado (tem de estar instalado num servidor diferente do uPath enterprise software e

do IMS) e for aceite uma imagem ampliada 20x com a coloração e o tipo de tecido apropriado, o uPath enterprise software aciona

automaticamente a análise da lâmina completa (Whole Slide Analysis, WSA).

6. A WSA analisa automaticamente toda a imagem digitalizada.

7. Uma vez concluída a WSA, o patologista é notiﬁcado dentro da visualização do uPath enterprise software através de uma barra azul

com a mensagem "analysis successful" (análise bem-sucedida).

8. O patologista pode selecionar ROI especíﬁcas para pontuar utilizando as ferramentas ROI e Exclusion (Exclusão) dentro do uPath

enterprise software.

9. O patologista revê os resultados da análise da imagem e aceita a pontuação ou substitui-a manualmente.

Coloração

• A preparação e a coloração do tecido devem ser feitas de acordo com as recomendações da folha de métodos do anticorpo VENTANA

anti-HER2/neu (4B5).

9 Guia do algoritmo de análise de imagens da mama uPath HER2 (4B5)

• Todos os controlos adequados deverão ser revistos e as lâminas deverão ser recoradas se a coloração não cumprir as linhas de

orientação enunciadas na folha de métodos do anticorpo VENTANA anti-HER2/neu (4B5).

• O algoritmo uPath HER2 (4B5) requer que seja utilizado o anticorpo VENTANA anti-HER2/neu (4B5), bem como quaisquer materiais ou

abastecimentos adicionais referidos na folha de métodos do anticorpo VENTANA anti-HER2/neu (4B5), para efetuar a coloração dos

tecidos antes da análise.

• O anticorpo VENTANA anti-HER2/neu (4B5) deteta a proteína HER2 em tecido mamário FFPE corado com o ultraView Universal DAB

Detection Kit num equipamento BenchMark ULTRA.

Captura de imagens

Para digitalizar as lâminas, é necessário um digitalizador de lâminas VENTANA DP 200. As imagens têm de ser digitalizadas com

uma ampliação de 20x. Recomenda-se que o tecido não tenha dobras nem tinta. Se houver secções grandes da imagem que estejam

desfocadas, recomenda-se que as lâminas sejam digitalizadas novamente. Para mais informações sobre o processo de digitalização,

consulte o Guia do utilizador IVD do digitalizador de lâminas VENTANA DP 200 (PN 1017149PT).

Navegação geral: uPath enterprise software

O uPath enterprise software destina-se a ser personalizado em função das necessidades individuais e da instituição, incluindo,

sem limitações, a conﬁguração de relatórios e a interface de utilizador. Este guia do algoritmo irá concentrar-se nas ferramentas

necessárias à utilização apenas do algoritmo uPath HER2 (4B5). Para mais informações sobre o uPath enterprise software, consulte o

Manual do utilizador do uPath enterprise software.

10 Guia do algoritmo de análise de imagens da mama uPath HER2 (4B5)

Fluxo de trabalho do patologista

Abrir um caso no uPath Enterprise Software

Para aceder a imagens de tecido mamário corado com o anticorpo VENTANA anti-HER2/neu (4B5), faça duplo clique num caso ou

selecione um caso e prima o separador Viewer (Visualização) (Figura 1).

É apresentado um ecrã com todas as imagens associadas a um caso (Figura 2).

Figura 2

Figura 1

11 Guia do algoritmo de análise de imagens da mama uPath HER2 (4B5)

Depois de uma lâmina corada com o anticorpo VENTANA anti-HER2/neu (4B5) ser digitalizada num digitalizador de lâminas

VENTANA DP 200 com uma ampliação de 20x, a imagem é importada para o uPath enterprise software e associada a um caso. O

algoritmo uPath HER2 (4B5) aciona automaticamente a WSA. O tempo necessário para concluir o passo de pré-cálculo da WSA

depende das especiﬁcações do servidor, do tamanho da imagem e do número de imagens que estiverem em ﬁla de espera. Se for

apresentada a mensagem "waiting to start auto-analysis" (a aguardar para iniciar a análise automática), isso signiﬁca que as imagens

estão na ﬁla e ainda não foram analisadas. Se for apresentada a mensagem "analyzing" (a analisar), isso signiﬁca que está a ser

executada a WSA (Figuras 3 e 4).

Depois de a imagem ter sido completamente analisada via WSA no uPath enterprise software, é apresentada a mensagem "analysis

successful" (análise bem-sucedida) por baixo da imagem da lâmina no Viewer (Visualização) (Figura 5). Não é possível pontuar as

imagens antes de a WSA ser concluída com êxito.

Figura 5

Figura 4

Figura 3

12 Guia do algoritmo de análise de imagens da mama uPath HER2 (4B5)

Desenhar a(s) ROI do total do tumor: selecionar a área do tumor

Utilize o botão da ferramenta Freehand (Mão livre) no menu pendente ROI (Figura 6) para selecionar a(s) área(s) do tumor na imagem

da lâmina corada IHQ que vai ser analisada. A Figura 7 ilustra uma imagem com uma única ROI desenhada. É possível desenhar mais

ROI. Cada área selecionada fará com que seja apresentada uma ROI no Slide Panel (Painel de lâminas) (Figure 8).

Figura 7

Figura 8

Figura 6

13 Guia do algoritmo de análise de imagens da mama uPath HER2 (4B5)

Desenhar a(s) ROI do total do tumor: área de exclusão

Ao desenhar as ROI, pode ser necessário excluir algumas áreas. Na secção abaixo relativa às características de coloração, iremos

abordar áreas especíﬁcas que devem ser evitadas ou omitidas e apresentar exemplos. Utilize a ferramenta de exclusão Freehand

(Mão livre) do menu pendente Exclusion (Exclusão) (Figura 9) para excluir áreas especíﬁcas (Figura 10). Se houver grandes áreas da

imagem enevoadas ou desfocadas, digitalize novamente a lâmina.

As áreas excluídas não serão analisadas pelo algoritmo uPath HER2 (4B5), e as células tumorais coradas e não coradas dentro desta

área serão excluídas da área de análise total. Se a ROI já tiver sido analisada e for utilizada uma exclusão, a ROI terá de ser reanalisada

e a sobreposição será devidamente atualizada.

Desenhar um grande número de exclusões, especialmente de exclusões complicadas desenhadas com a ferramenta Freehand (Mão

livre), pode ser moroso e ter impacto na eﬁciência do ﬂuxo de trabalho, tendo apenas um impacto marginal na pontuação ﬁnal. Se um

caso necessitar de um grande número de exclusões, o patologista deve

• Desenhar várias ROI e excluir porções de tecido que considere não pontuáveis utilizando o mínimo possível a ferramenta Exclusion

(Exclusão).

• Limitar as exclusões e substituir manualmente a pontuação por outra pontuação.

Desenhar a(s) ROI do total do tumor: eliminação

Se uma ROI do total do tumor selecionada não for de qualidade ótima, pode ser eliminada. Selecione a ROI do total do tumor clicando no

centro da ROI na imagem e depois clicando no botão Delete (Eliminar) dentro do Slide Panel (Painel de lâminas) (Figura 11) ou dentro

da imagem da lâmina, próximo da ROI (Figura 12). Será apresentada uma janela de conﬁrmação. Selecione Conﬁrm (Conﬁrmar) para

eliminar a ROI selecionada. Selecione Cancel (Cancelar) para manter a ROI.

Figura 9

Figura 11

Figura 12

Figura 10

14 Guia do algoritmo de análise de imagens da mama uPath HER2 (4B5)

Depois de desenhadas todas as ROI do total do tumor e/ou áreas de exclusão, a imagem está pronta para ser analisada. Selecione a ROI

do total do tumor clicando no centro da ROI que vai ser analisada ou clicando na ROI no Slide Panel (Painel de lâminas). Para cada ROI,

clique no botão Image Analysis (Análise de imagem) dentro do Slide Panel (Painel de lâminas) (Figura 13) ou ao lado da ROI (Figura 14).

Assim que a análise de HER2 estiver concluída, o resultado é apresentado no Slide Panel (Painel de lâminas) em dois sítios: por baixo

da Slide Score (Pontuação da lâmina) e ao lado das ROI (Figura 15). A Slide Score (Pontuação da lâmina) baseia-se na soma dos

estados de HER 2 em todas as ROI selecionadas, e será esta a pontuação que vai ser apresentada no relatório.

É também possível ver informações mais detalhadas no ecrã detalhado Slide Score (Pontuação da lâmina) e no ecrã detalhado ROI

Details (Detalhes da ROI) clicando no ícone de apresentação detalhada (Figura 16). Aparece a apresentação detalhada da Slide Score

(Pontuação da lâmina) (Figura 17). Para ocultar estas informações, clique novamente no mesmo ícone.

Figura 15

Figura 17

Figura 16

Figura 13

Figura 14

15 Guia do algoritmo de análise de imagens da mama uPath HER2 (4B5)

Análise de imagem de HER2: sobreposição de cor

Depois de ter sido premido o botão ROI(s) Analysis (Análise de ROI) e de o tecido ter sido analisado, é aplicada uma sobreposição

de cor sobre a ROI. Na imagem abaixo (Figura 18), a sobreposição vermelha representa membranas celulares que se determinou

terem coloração positiva para HER2. Quando se agarra na imagem (clicando com o botão esquerdo do rato e movendo a imagem) a

sobreposição desaparece (Figura 19). Quando se deixa de premir o botão do rato, a sobreposição reaparece (Figura 18).

Figura 18

Figura 19

16 Guia do algoritmo de análise de imagens da mama uPath HER2 (4B5)

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Roche uPath HER2 (4B5) image analysis for Breast Algorithm Manual do usuário

Marca: Roche

Modelo: uPath HER2 (4B5) image analysis for Breast Algorithm

Tipo: Manual do usuário

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Roche uPath HER2 (4B5) image analysis for Breast Algorithm Manual do usuário

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